Дневник по практике микробиология
Рефераты по медицине
Дневник преддипломной практики
ХАНТЫ-МАНСИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ
СРЕДНЕЕ – ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАНИЕ
СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 060110-0407 «Лабораторная диагностика»
Студента 3-го курса, группа 304-1
Место прохождения практики:
Бактериологическая лаборатория города Ханты-Мансийска
Срок практики с «19»апреля по «8»мая 2010г.
Общий: ****. главная мед сестра ОКБ
Я, *******, студент 3 курса, 304/1 группы. Отделения “Лабораторная диагностика”. Проходил практику по профилю специальности с 19.04.10 по 8.05.10 года в Бактериологической лаборатории под руководством *********.
За время практики я овладел следующими навыками:
Посев мазков из зева и носа на дифтерию (капельная группа);
Пересев мазков из зева и носа (капельная группа);
Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы (капельная группа);
Посев первичного кала (кишечная группа);
Покраска мазков по грамму;
Посев содержимого женских половых органов на микрофлоре;
Посев мочи на микрофлоре;
Посев мазков из зева на микрофлоре;
Отвивка на Рессель;
Постановка короткого пёстрого биохимического ряда;
Постановка дисков на антибиотикочувствительность;
Постановка пробы на плазмокоагуляцию;
Реакция аглютинации на стекле;
Разлив сред в чашки и пробирки;
Забор смывов с операционных палат.
1 день практики-19.04.10
1. Мочу собирают в стерильную баночку и доставляют в лабораторию. Берут среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов. Моча поступает в регистратуру. Лаборант присваивает анализу номер и передаёт мочу на посев. Берём 2 мл. мочи, переносим в пробирку с 0.5 мл среды ТТХ и убираем в термостат. Через 2 часа вытаскиваем из термостата и смотрим на цвет, если цвет изменился на красный, появилась муть, следовательно, в моче имеются микроорганизмы. Для дальнейшего исследования ставим мочу на аппарат ROBOBAKT. На следующий день при появлении роста на питательных средах врач-бактериолог учитывает результаты.
2 день практики-20.04.10
1. Материал для исследования забираем сухим стерильным тампоном. Берётся чашка с кровяным агаром, на ней ставится число и номер. Прикасаемся тампоном со всех сторон по середине чашки, затем берем петлю, обжигаем над пламенем спиртовки, остужаем и рисуем перпендикулярные штрихи по всей чашке (тампон-петля). Убираем в термостат на сутки.
2. Посев содержимого женских половых органов:
Содержимое женских половых органов забирают тампоном в стерильные пробирки и доставляем в лабораторию. Подписываем на чашке номер, присвоенный в регистратуре. Сеется на кровяной агар по методу Голда. Берём тампон и проводим всеми сторонами несколько раз по середине чашки Петри, тампон ставим обратно в пробирку. Над пламенем спиртовки обжигаем петлю и начинаем растирать нанесённый материал, не отрываясь, рисуем 40 штрихов вверх, обжигаем петлю и наносим 4 штриха поперёк предыдущего сектора. Петлю обжигаем, остужаем и наносим 4 штриха не касаясь большого сектора, поперёк первых 4 – х штрихов. Петлю обжигаем, остужаем и поперёк вторых 4 – х штрихов наносим ещё 4 штриха не доходя до сектора А.
3 день практики-21.04.10
1 Взятие исследуемого материала:
Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете, отдельно по порциям А, В, С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 часов от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирка находилась в строго вертикальном положении.
Посев исследуемого материала: По 0,1 мл каждой порции желчи высевают на чашку с кровяным агаром; по 0,5 мл на чашку со средой Эндо; в соотношении 1:9 в среду накопления. Для обеспечения роста анаэробов посев производят на среду для контроля стерильности. Посевы и исходный материал помещают в термостат при 37°. На второй день учитывают результаты первичных посевов. В случае бактериального роста на кровяном агаре, подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после микроскопии окрашенных по Граму мазков, проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. При подозрении на рост анаэробных культур посевы инкубируют в анаэростате. С целью выделения сальмонелл, в последующие 3 дня делают высевы на элективные среды (Висмут-сульфит агар) как со среды накопления, так и с нативной желчи, которая в течение 3 дней выдерживается в термостате.
Если забранный материал доставлен в лабораторию сухим тампоном в пробирке, то сеем на Кровяной агар по Голду и заливаем 5 мл сахарного бульона для обогащения. Чашку ставим в термостат на сутки. Если забранный материал доставлен в лабораторию в пробирке залитый сахарным бульоном, то сеем на кровяной агар штрихами (если есть подпись на «анаэробы», то добавляем среду Шадлера, сеем методом штриха). Кровяной агар ставим в термостат, а среду Шадлера в эксикатор с газпаком.
4 день практики-22.04.10
2- покраска мазков по Граму
1.Пересев производится на Висмут-сульфит агар петлей (методом штриха). Чашку карандашом по стеклу делим пополам. В верхней части чашки пишем №,число и букву Н – нативная желчь. В нижней части букву О – среда обогащения.
2. Покраска мазков по Граму:
Мазок фиксируем 3 кратным движением над огнем спиртовки.
На стекло накладываем бумажку, пропитанную Генциан Виалет, заливаем водой на 2 мин.
Снимаем бумагу и заливаем раствором Люголя на 2 мин.
Обесцвечивать спиртом в течение 30 сек.
Смываем водой и накладываем бумагу пропитанную фуксином. Заливаем водой на 2 мин. Смываем водой и высушиваем.
2- Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы.
1. Материал для исследования забираем сухим, стерильным тампоном. Отдельно из зева и из носа. Берётся чашка Клауберга, на ней ставится число и номер. Прикасаемся тампоном со всех сторон, делая площадку, отрываемся и делаем штрихи до середины чашки (нос), затем с другой стороны точно также засеваем зев. Ставим на 24-48 часов в термостат при tє 37є С.
2.Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы:
Мазок берётся стерильным тампоном, в стерильную пробирку. В лаборатории пробирка с мазком заливается физ. раствором и стоит 5 минут, затем эмульгируется (т.е. перемешивается). Затем закапываем по 0,2 мл на пластинку в каждую луночку специальное масло, кроме 6. Закрываем крышкой и помещаем в термостат на 24 – 48 часов при tє 37єС.
6 день практики-24.04.10
1. Забор материала проводят из носоглотки (с задней стенки глотки), сухим стерильным тампоном, загнутым под тупым углом, язык фиксируют шпателем.
Засевается последовательно на две чашки КУА (казеиново-угольный агар) методом штриха, несколько секторов. В центре чашки тампоном производим «сброс» основной массы микроорганизмов, для получения изолированных колоний.
В агар добавляется пенициллин для подавления сопутствующей флоры.
После засева чашки помещаем в термостат с большим количеством влаги. Просмотр чашек проводят через 48- 72 часа с помощью стереомикроскопа. При отсутствии роста через 72 часа, чашки ставим в термостат ещё на 48 часов. При отсутствии роста через 5 суток выдаём окончательный результат (отрицательный).
При наличии роста колонии коклюша имеют вид- выпуклые, гладкие, ровные, блестящие края, серого цвета в виде капелек ртути.
При обнаружении коклюша делают мазок на микроскопию (красим по Граму) и ставим реакцию агглютинации с коклюшной сывороткой.
Если материал доставили в лабораторию в среде АМИЕС сеем на две чашки (с антибиотиком и без).
Сухой тампон сразу после Влажный тампон забора высевают на чашку с антибиотиком (для перемещения).
высевают 0,1 мл. втирая
Манипуляция (см. 5 день)
7 день практики-26.04.10
1.- Исследование на коклюш.
1. Манипуляция (см. 6 день)
2. Микроскопия мазков на трихомонады:
Для проведения исследования берут чистое, обезжиренное стекло, обжигаем над пламенем горелки. С помощью петли берём каплю исследуемого материала и наносим её на стекло, добавляем специальное масло и смотрим под стереомикроскопом. Отмечаем только живые, подвижные, не повреждённые трихомонады.
1.Посев ликвора, крови, носоглоточной слизи (на менингококк).
2. Посев, носоглоточной слизи (на менингококк).
1. Посев ликвора (на менингококк):
Посев осуществляют в ламинарном боксе. Ликвор сеют на среды: кровяной агар, шоколадный, сывороточный агар по 0,1мл, втирают шпателем (каждый раз новым) и оставляют на 24 часа в СО2-инкубаторе. Также делаем нативный мазок ликвора и окрашиваем методом Лёффлера и по Граму. Остатки ликвора засеваем в среду обогащения (0,1% полужидкий агар, в соотношении 4 мл. полужидкого агара + 1 мл. ликвора) Если ликвора мало в 4 мл. 0,1% полужидкого агара вносим 1 мл. сыворотки крупного рогатого скота + 0,2-0,5 мл. ликвора.
2.Посев, носоглоточной слизи (на менингококк):
Сеется на чашку сывороточного агара у постели больного, если поступает в лабораторию в среде АМИЕС, то посев проводим в лаборатории. В лабораторию чашка с посевом доставляют в грелках, сразу помещают в СО2-термостат при температуре 37 градусов.
9 день практики-28.04.10
Взятие исследуемого материала:
Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете, отдельно по порциям А, В, С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 часов от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирка находилась в строго вертикальном положении.
Посев исследуемого материала:
По 0,1 мл каждой порции желчи высевают на чашку с кровяным агаром; по 0,5 мл на чашку со средой Эндо; в соотношении 1:9 в среду накопления. Для обеспечения роста анаэробов посев производят на среду для контроля стерильности. Посевы и исходный материал помещают в термостат при 37 градусах. На второй день учитывают результаты первичных посевов. В случае бактериального роста на кровяном агаре, подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после микроскопии окрашенных по Грамму мазков, проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. При подозрении на рост анаэробных культур посевы инкубируют в анаэростате. С целью выделения сальмонелл, в последующие 3 дня делают высевы на элективные среды (Висмут-сульфит агар) как со среды накопления, так и с нативной желчи, которая в течение 3 дней выдерживается в термостате.
Высев производится на Висмут-сульфит агар петлей (методом штриха). Чашку карандашом по стеклу делим пополам. В верхней части чашки пишем №,число и букву Н – нативная желчь. В нижней части букву О – среда обогащения.
11 день практики-30.04.10
1. Первичный посев кала.
1. Первичный посев кала (на бакпосев):
Посев осуществляем на 2-е плотные питательные среды: Плоскирева и Левина, а для детских посевов добавляем чашку со средой Эндо, для дальнейшего исследования на энтеропатогенные кишечные палочки. Нанесение материала начинают со среды Плоскирева, Левина, Эндо. После нанесения материала начинаем его втирать в среду шпателем. Сначала делаем площадку 1-2 см и далее не касаясь этой площадки штрихами распределяем нанесённый материал. Распределив материал по поверхности агара на одной чашке, переносим шпатель, не обжигая его, на вторую, а затем на третью чашку. Втирание шпателем начинаем со среды Эндо, Левина, Плоскирева.
При таком посеве получается рост изолированных колоний. Полученные изолированные колонии служат для пересева и получения чистой культуры изучаемого микроба. При высокой степени обсеменённости легко выявить патогенные микроорганизмы с прямого посева. После прямого посева испражнения заливаем средой обогащения (селенитовый бульон) в соотношении 1:5. Все посевы помещаем в термостат при температуре 37 градусов на 24 часа. Через сутки со среды обогащения делаем высев на дифференциально-диагностическую среду Висмут-сульфит агар (для выделения сальмонелл).
Мочу собирают в стерильную баночку и доставляют в лабораторию. Берут среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов: мытьё кипячёной водой с мылом. 20-30 мл надосадочная часть с грушей над спиртовкой сливается в хлорамин. Осадок перемешивается и 0,5 мл переносится в пробирку, заливается селенитовой средой обогащения 4,5 мл, двойной концентрации 1:1 и прямой посев мочи на среду Эндо петлей. Ставим в термостат на сутки. На второй день пересев на среду ВСА петлей.
12 день практики-03.04.10
1.Посев кала (на псевдотуберкулез).
2.Приготовление мазков на микроскопию со среды Блаурокка для определения бифидобактерий и окраска по Граму.
1. Посев кала (на псевдотуберкулез):
Кал берется в сухую стерильную пробирку предварительно взвешенную (на пробирке указан вес) – в количестве 1 гр. с помощью алюминиевой петли. Доставляют в лабораторию не позднее 2 часов. Пробирки с испражнениями больных помещают в морозильную камеру бытового холодильника (t-10-15 градусов) на 18-24 часа. После этого пробирки переносят в холодильник при t-+6-12 градусов на 4 часа. Через 18-24 часа производят первый высев на среду Эндо. Перед посевом пробирки не взбалтывают. Посев производят бактериологической петлей штрихами. Пересевы с первичной среды накопления, если не выделилась культура, повторяют на 3, 5 и 7 день. Чашки с посевами инкубируют в термостате: со средой Эндо – при t-22-25 градусов. Посевы просматривают через 24-36 часов.
2. Приготовление мазков на микроскопию со среды Блаурокка для определения бифидобактерий:
Предметное стекло обжигаем над пламенем горелки. Со дна пробирки пипеткой набираем 0,1 мл среды, наносим на предметное стекло, при этом растирая, высушиваем на воздухе. Фиксируем 3-х кратным проведением над пламенем горелки. Красим по Грамму.
1. Посев кала количественным методом:
Кал берётся в сухую стерильную пробирку, предварительно взвешенную (на пробирке будет указан вес) – в количестве 1 гр. с помощью алюминиевой петли после естественной дефекации и доставляют в лабораторию не позднее 1 часа. Взвешиваем пробирку с калом и заливаем забуференным раствором для дизбактериоза (см. по таблице). Например: если 0,3 гр. кала, то 0,1 мл забуференного раствора. Делаем основное разведение 1:10. Из основного разведения 10-1 переносим пипеткой (каждый раз меняя пипетку) 0,1 мл материала во 2-ю пробирку, затем тщательно перемешивая из 2-й в 3-ю переносим 0,5 мл материала, из 3-й в 4-ю – 0,5 мл материала, из 4-й в 5-ю – 0,5 мл. Приготовили следующие разведения 10-3, 10-4, 10-5, 10-6. Из основного разведения 10-1 проводим посев на среды Плоскирева, Левина.
Из 10-4 – на среду желточно-солевого агара.
Из 10-5 – на среду Эндо и кровяной агар.
Из 10-6 – на среду Эндо.
Разведения сбрасываем в емкость с 3% хлорамином. Чашки и основное разведение ставим в термостат на сутки. На второй день пересев с основного разведения на среду Висмут-сульфит агар.
14 день практики-05.05.10
1.Отвивка на Рессель: Отвивка проводится для первичной идентификации энтеробактерий. Отвивка колоний, которые отмечены врачом. Прокаливаем петлю докрасна, остужаем, берём изолированную колонию и наносим её на Рессель методом “косяка”. Сначала делаем посев на “косяк”, затем прокалываем до дна. Ставим в термостат на сутки.
2. Постановка короткого пёстрого биохимического ряда:
С плотной питательной среды берём отмеченную врачом культуру (колонию) и вносим в 1 пробирку, делаем посев сначала на косяке снизу вверх, затем проколом до дна, затем пробу на индол. Во 2 и 3 пробирку делаем посев проколом до дна. Добавляем 4 пробирку с мочевиной, если лактоза негативная или лактоза позитивная (по просьбе врача). В 4 маслёну (мочевину) эмульгируем.
Рессель Гинчев 0,4% МПА Мочевина
15 день практики-06.05.10
1. Приготовление сред.
2. Разлив сред в чашки.
3. Разлив питательных сред в пробирки.
Агар с гретой кровью (шоколадный агар):
Принцип: Прогревание крови способствует освобождению из эритроцитов факторов роста Х и V необходимых для культивирования гемофилов.
Приготовление: 1)К 100 мл расплавленного и охлаждённого до 80єС питательного агара, рН 7,4, добавляют 10 мл дефибринированной крови лошади или человека (без консервантов), тщательно перемешивают, после чего помещают в водяную баню и постоянно встряхивая держат при t 70є – 80єС до тех пор пока цвет агара не станет шоколадным (25 – 30 мин).2)5 мл дефибринированной крови кролика и 100 мл питательного агара тщательно взбалтывают и ставят на 2 – 3 мин в водяную баню при 80єС. Затем добавляют ещё 5 мл крови и вновь ставят в водяную баню на 2 – 3 мин. Шоколадный агар должен иметь светло – коричневую окраску. Среду разливают в чашки Петри. Хранят не более 2 – х недель при t 4 – 6єС.
16 день практики-07.05.10
1. Смывы в операционном блоке.
2. Исследование воздуха.
1. Смывы в операционном блоке:
Смыв делают стерильным тампоном который находится в пробирки залитый 1% пептонной водой с гипосульфатом – 0,5% (для нейтрализации дез. р-ров) 4 – 5 мл.
Порядок взятия смывов:
Смывы берутся с любой поверхности площадью 10 см. После чего тампон опускают в пробирку, стараясь не задеть края пробирки. Взятая проба регистрируется и отправляется в лабораторию для дальнейших исследований.
В лаборатории смывы сеют на среду Эндо с помощью петли. С этих забранных смывов берут 0,2 мл 1% пептонной воды и вносят в среду обогащения и солевой бульон 5 мл, затем ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 37 градусов. Через сутки делают повторный высев: с 1% пептонной воды на среду Эндо, а с солевого бульона на ЖСА (пробирки сбрасываем), чашки ставим в термостат на 18-24 часа.
Если есть рост колоний, то с материалом работает врач. Если нет колоний, то Эндо в убивку, а ЖСА ещё на 24 часа в термостат.
2.Воздух в помещениях
-седиментационный метод – основан на механическом оседании микроорганизмов.
17 день практики-08.05.10
1. Исследование воды (В санитарной группе).
2 Прием биоматериала на бак. исследования.(регистратура)
3 Выдача в отделения ОКБ стерильной посуды для забора проб. (регистратура)
4 Ведение учета выдачи, возврата лабораторной посуды(регистратура).
5 Ведение маркировки рабочих журналов, регистрация поступающих анализов. (регистратура)
6 Сортировка биоматериала по производственным группам.регистратура)
1.Санитарно-бактериологическое исследование воды:
Для исследования вода забирается из следующих источников:
колодцы различного типа;
открытые водоёмы (реки, озёра, моря);
Посев водопроводной воды:
Спиртовкой обжигаем кран, из которого будем проводить забор воды, чтобы в бутыль не попали микробы, находящиеся на поверхности крана. Затем пускаем воду, чтобы немного стекла. После чего набираем в специальный бутыль 333 мл воды. Производим посев: 1 мл воды в МПА, в чашку Петри (2 чашки).
10 мл воды в ГНС концентрированный 3 пробирки.
100 мл воды в ГНС концентрированный 3 бутылки. 1 мл воды в ГНС неконцентрированный. Ставим в термостат при температуре 37 градусов.
18 день практики-29.04.10
1. Посев кала на дизбактериоз.
1. Посев кала на дизбактериоз:
Кал забирают в сухую стерильную пробирку, предварительно взвешенную (на пробирке указан вес) – в количестве 1 грамма, с помощью алюминиевой петли после естественной дефекации и доставляют в лабораторию не позднее 1 часа.
Из 10-3 разведения сеем на чашки: Лактобациллы, Сабуро по 0,1 мл втираем шпателем досуха возле спиртовки.
Для выявления анаэробной микрофлоры делаем высев в среду Блаурокка (на дно) из разведений 10-5, 10-7, 10-9 в 2-е пробирки. В 5,7,9 по 1мл, а в 6,8,10 по 0,1 мл.
Бактериологические посевы
ХАНТЫ-МАНСИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ
СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 060110-0407 «Лабораторная диагностика»
Студента 3-го курса, группа 304-1
Каирбекова Мавлета Алихановича
Место прохождения практики:
Бактериологическая лаборатория города Ханты-Мансийска
Срок практики с «19»апреля по «8»мая 2010г.
Общий: Мезенова Н.И. главная мед сестра ОКБ
Я, Каирбеков Мавлет Алиханович, студент 3 курса, 304/1 группы. Отделения Лабораторная диагностика. Проходил практику по профилю специальности с 19.04.10 по 8.05.10 года в Бактериологической лаборатории под руководством Гималовой Натальи Алексеевны.
За время практики я овладел следующими навыками:
Посев мазков из зева и носа на дифтерию (капельная группа);
Пересев мазков из зева и носа (капельная группа);
Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы (капельная группа);
Посев первичного кала (кишечная группа);
Покраска мазков по грамму;
Посев содержимого женских половых органов на микрофлоре;
Посев мочи на микрофлоре;
Посев мазков из зева на микрофлоре;
Отвивка на Рессель;
Постановка короткого пёстрого биохимического ряда;
Постановка дисков на антибиотикочувствительность;
Постановка пробы на плазмокоагуляцию;
Реакция аглютинации на стекле;
Разлив сред в чашки и пробирки;
Забор смывов с операционных палат.
бактериологический посев моча смыв
1 день практики-19.04.10
. Мочу собирают в стерильную баночку и доставляют в лабораторию. Берут среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов. Моча поступает в регистратуру. Лаборант присваивает анализу номер и передаёт мочу на посев. Берём 2 мл. мочи, переносим в пробирку с 0.5 мл среды ТТХ и убираем в термостат. Через 2 часа вытаскиваем из термостата и смотрим на цвет, если цвет изменился на красный, появилась муть, следовательно, в моче имеются микроорганизмы. Для дальнейшего исследования ставим мочу на аппарат ROBOBAKT.На следующий день при появлении роста на питательных средах врач-бактериолог учитывает результаты.
2 день практики-20.04.10
. Материал для исследования забираем сухим стерильным тампоном. Берётся чашка с кровяным агаром, на ней ставится число и номер. Прикасаемся тампоном со всех сторон по середине чашки, затем берем петлю, обжигаем над пламенем спиртовки, остужаем и рисуем перпендикулярные штрихи по всей чашке (тампон-петля). Убираем в термостат на сутки.
. Посев содержимого женских половых органов:
3 день практики-21.04.10
Взятие исследуемого материала:
Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете, отдельно по порциям А, В, С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 часов от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирка находилась в строго вертикальном положении.
Посев исследуемого материала: По 0,1 мл каждой порции желчи высевают на чашку с кровяным агаром; по 0,5 мл на чашку со средой Эндо; в соотношении 1:9 в среду накопления. Для обеспечения роста анаэробов посев производят на среду для контроля стерильности. Посевы и исходный материал помещают в термостат при 37°. На второй день учитывают результаты первичных посевов. В случае бактериального роста на кровяном агаре, подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после микроскопии окрашенных по Граму мазков, проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. При подозрении на рост анаэробных культур посевы инкубируют в анаэростате. С целью выделения сальмонелл, в последующие 3 дня делают высевы на элективные среды (Висмут-сульфит агар) как со среды накопления, так и с нативной желчи, которая в течение 3 дней выдерживается в термостате.
Если забранный материал доставлен в лабораторию сухим тампоном в пробирке, то сеем на Кровяной агар по Голду и заливаем 5 мл сахарного бульона для обогащения. Чашку ставим в термостат на сутки. Если забранный материал доставлен в лабораторию в пробирке залитый сахарным бульоном, то сеем на кровяной агар штрихами (если есть подпись на «анаэробы», то добавляем среду Шадлера, сеем методом штриха). Кровяной агар ставим в термостат, а среду Шадлера в эксикатор с газпаком.
— покраска мазков по Граму
. Покраска мазков по Граму:
Мазок фиксируем 3 кратным движением над огнем спиртовки.
На стекло накладываем бумажку, пропитанную Генциан Виалет, заливаем водой на 2 мин.
Снимаем бумагу и заливаем раствором Люголя на 2 мин.
Обесцвечивать спиртом в течение 30 сек.
Смываем водой и накладываем бумагу пропитанную фуксином. Заливаем водой на 2 мин. Смываем водой и высушиваем.
— Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы.
. Материал для исследования забираем сухим, стерильным тампоном. Отдельно из зева и из носа. Берётся чашка Клауберга, на ней ставится число и номер. Прикасаемся тампоном со всех сторон, делая площадку, отрываемся и делаем штрихи до середины чашки (нос), затем с другой стороны точно также засеваем зев. Ставим на 24-48 часов в термостат при tº 37º С.
.Посев содержимого женских половых органов на генитальные тест системы:
6 день практики-24.04.10
. Забор материала проводят из носоглотки (с задней стенки глотки), сухим стерильным тампоном, загнутым под тупым углом, язык фиксируют шпателем.
Засевается последовательно на две чашки КУА (казеиново-угольный агар) методом штриха, несколько секторов. В центре чашки тампоном производим «сброс» основной массы микроорганизмов, для получения изолированных колоний.
В агар добавляется пенициллин для подавления сопутствующей флоры.
После засева чашки помещаем в термостат с большим количеством влаги. Просмотр чашек проводят через 48- 72 часа с помощью стереомикроскопа. При отсутствии роста через 72 часа, чашки ставим в термостат ещё на 48 часов. При отсутствии роста через 5 суток выдаём окончательный результат (отрицательный).
При наличии роста колонии коклюша имеют вид- выпуклые, гладкие, ровные, блестящие края, серого цвета в виде капелек ртути.
При обнаружении коклюша делают мазок на микроскопию (красим по Граму) и ставим реакцию агглютинации с коклюшной сывороткой.
Если материал доставили в лабораторию в среде АМИЕС сеем на две чашки (с антибиотиком и без).
Сухой тампон сразу после Влажный тампон забора высевают на чашку с антибиотиком. (для перемещения)
высевают 0,1 мл. втирая
Манипуляция (см. 5 день)
.- Исследование на коклюш.
. Манипуляция (см. 6 день)
. Микроскопия мазков на трихомонады:
Для проведения исследования берут чистое, обезжиренное стекло, обжигаем над пламенем горелки. С помощью петли берём каплю исследуемого материала и наносим её на стекло, добавляем специальное масло и смотрим под стереомикроскопом. Отмечаем только живые, подвижные, не повреждённые трихомонады.
.Посев ликвора, крови, носоглоточной слизи (на менингококк).
. Посев, носоглоточной слизи (на менингококк).
. Посев ликвора (на менингококк):
Посев осуществляют в ламинарном боксе. Ликвор сеют на среды: кровяной агар, шоколадный, сывороточный агар по 0,1мл, втирают шпателем (каждый раз новым) и оставляют на 24 часа в СО2-инкубаторе. Также делаем нативный мазок ликвора и окрашиваем методом Лёффлера и по Граму. Остатки ликвора засеваем в среду обогащения (0,1% полужидкий агар, в соотношении 4 мл. полужидкого агара + 1 мл. ликвора ) Если ликвора мало в 4 мл. 0,1% полужидкого агара вносим 1 мл. сыворотки крупного рогатого скота + 0,2-0,5 мл. ликвора.
.Посев, носоглоточной слизи (на менингококк):
Сеется на чашку сывороточного агара у постели больного, если поступает в лабораторию в среде АМИЕС, то посев проводим в лаборатории. В лабораторию чашка с посевом доставляют в грелках, сразу помещают в СО2-термостат при температуре 37 градусов.
Взятие исследуемого материала:
Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете, отдельно по порциям А, В, С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 часов от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирка находилась в строго вертикальном положении.
Посев исследуемого материала:
По 0,1 мл каждой порции желчи высевают на чашку с кровяным агаром; по 0,5 мл на чашку со средой Эндо; в соотношении 1:9 в среду накопления. Для обеспечения роста анаэробов посев производят на среду для контроля стерильности. Посевы и исходный материал помещают в термостат при 37 градусах. На второй день учитывают результаты первичных посевов. В случае бактериального роста на кровяном агаре, подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после микроскопии окрашенных по Грамму мазков, проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. При подозрении на рост анаэробных культур посевы инкубируют в анаэростате. С целью выделения сальмонелл, в последующие 3 дня делают высевы на элективные среды (Висмут-сульфит агар) как со среды накопления, так и с нативной желчи, которая в течение 3 дней выдерживается в термостате.
. Первичный посев кала.
. Первичный посев кала (на бакпосев):
Посев осуществляем на 2-е плотные питательные среды: Плоскирева и Левина, а для детских посевов добавляем чашку со средой Эндо, для дальнейшего исследования на энтеропатогенные кишечные палочки. Нанесение материала начинают со среды Плоскирева, Левина, Эндо. После нанесения материала начинаем его втирать в среду шпателем. Сначала делаем площадку 1-2 см и далее не касаясь этой площадки штрихами распределяем нанесённый материал. Распределив материал по поверхности агара на одной чашке, переносим шпатель, не обжигая его, на вторую, а затем на третью чашку. Втирание шпателем начинаем со среды Эндо, Левина, Плоскирева.
При таком посеве получается рост изолированных колоний. Полученные изолированные колонии служат для пересева и получения чистой культуры изучаемого микроба. При высокой степени обсеменённости легко выявить патогенные микроорганизмы с прямого посева. После прямого посева испражнения заливаем средой обогащения (селенитовый бульон) в соотношении 1:5. Все посевы помещаем в термостат при температуре 37 градусов на 24 часа. Через сутки со среды обогащения делаем высев на дифференциально-диагностическую среду Висмут-сульфит агар (для выделения сальмонелл).
Мочу собирают в стерильную баночку и доставляют в лабораторию. Берут среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов: мытьё кипячёной водой с мылом. 20-30 мл надосадочная часть с грушей над спиртовкой сливается в хлорамин. Осадок перемешивается и 0,5 мл переносится в пробирку, заливается селенитовой средой обогащения 4,5 мл, двойной концентрации 1:1 и прямой посев мочи на среду Эндо петлей. Ставим в термостат на сутки. На второй день пересев на среду ВСА петлей.
.Посев кала (на псевдотуберкулез).
.Приготовление мазков на микроскопию со среды Блаурокка для определения бифидобактерий и окраска по Граму.
. Посев кала (на псевдотуберкулез):
. Приготовление мазков на микроскопию со среды Блаурокка для определения бифидобактерий:
Предметное стекло обжигаем над пламенем горелки. Со дна пробирки пипеткой набираем 0,1 мл среды, наносим на предметное стекло, при этом растирая, высушиваем на воздухе. Фиксируем 3-х кратным проведением над пламенем горелки. Красим по Грамму.
. Посев кала количественным методом:
Разведения сбрасываем в емкость с 3% хлорамином. Чашки и основное разведение ставим в термостат на сутки. На второй день пересев с основного разведения на среду Висмут-сульфит агар.
.Отвивка на Рессель: Отвивка проводится для первичной идентификации энтеробактерий. Отвивка колоний, которые отмечены врачом. Прокаливаем петлю докрасна, остужаем, берём изолированную колонию и наносим её на Рессель методом косяка. Сначала делаем посев на косяк, затем прокалываем до дна. Ставим в термостат на сутки.
. Постановка короткого пёстрого биохимического ряда:
С плотной питательной среды берём отмеченную врачом культуру (колонию) и вносим в 1 пробирку, делаем посев сначала на косяке снизу вверх, затем проколом до дна, затем пробу на индол. Во 2 и 3 пробирку делаем посев проколом до дна. Добавляем 4 пробирку с мочевиной, если лактоза негативная или лактоза позитивная (по просьбе врача). В 4 маслёну (мочевину) эмульгируем.
Рессель Гинчев 0,4% МПА Мочевина
. Разлив сред в чашки.
. Разлив питательных сред в пробирки.
Агар с гретой кровью (шоколадный агар):
Принцип: Прогревание крови способствует освобождению из эритроцитов факторов роста Х и V необходимых для культивирования гемофилов.
. Смывы в операционном блоке.
. Смывы в операционном блоке:
Порядок взятия смывов:
Смывы берутся с любой поверхности площадью 10 см. После чего тампон опускают в пробирку, стараясь не задеть края пробирки. Взятая проба регистрируется и отправляется в лабораторию для дальнейших исследований.
В лаборатории смывы сеют на среду Эндо с помощью петли. С этих забранных смывов берут 0,2 мл 1% пептонной воды и вносят в среду обогащения и солевой бульон 5 мл, затем ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 37 градусов. Через сутки делают повторный высев: с 1% пептонной воды на среду Эндо, а с солевого бульона на ЖСА (пробирки сбрасываем), чашки ставим в термостат на 18-24 часа.
Если есть рост колоний, то с материалом работает врач. Если нет колоний, то Эндо в убивку, а ЖСА ещё на 24 часа в термостат.
.Воздух в помещениях
. Исследование воды (В санитарной группе).
Прием биоматериала на бак. исследования.(регистратура)
Выдача в отделения ОКБ стерильной посуды для забора проб.(регистратура)
Ведение учета выдачи, возврата лабораторной посуды(регистратура).
Ведение маркировки рабочих журналов, регистрация поступающих анализов.(регистратура)
Сортировка биоматериала по производственным группам.регистратура)
.Санитарно-бактериологическое исследование воды:
Для исследования вода забирается из следующих источников:
колодцы различного типа;
открытые водоёмы (реки, озёра, моря);
Посев водопроводной воды:
Спиртовкой обжигаем кран, из которого будем проводить забор воды, чтобы в бутыль не попали микробы, находящиеся на поверхности крана. Затем пускаем воду, чтобы немного стекла. После чего набираем в специальный бутыль 333 мл воды. Производим посев: 1 мл воды в МПА, в чашку Петри (2 чашки).
мл воды в ГНС концентрированный 3 пробирки.
мл воды в ГНС концентрированный 3 бутылки. 1 мл воды в ГНС неконцентрированный. Ставим в термостат при температуре 37 градусов.
. Посев кала на дизбактериоз.
. Посев кала на дизбактериоз:
Из 10-3 разведения сеем на чашки: Лактобациллы, Сабуро по 0,1 мл втираем шпателем досуха возле спиртовки.
Для выявления анаэробной микрофлоры делаем высев в среду Блаурокка (на дно) из разведений 10-5, 10-7, 10-9 в 2-е пробирки. В 5,7,9 по 1мл, а в 6,8,10 по 0,1 мл.