Серологическое исследование на брюшной тиф что это такое

Серологическое исследование на брюшной тиф что это такое

Антитела к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа (S. typhi) – это специфические белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование возбудителем брюшного тифа и участвующие в реакциях иммунной защиты организма.

Анти-Vi-антитела, возбудитель брюшного тифа.

Синонимы английские

Anti-Salmonella typhi Vi, Anti-Salmonella typhi Vi antibodies, Anti-Vi antibodies, Antibodies to the Vi capsule of Salmonella Typhi.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Брюшной тиф – это острое инфекционное заболевание с фекально-оральным путем передачи, возбудителем которого является Salmonella typhi. Инкубационный период длится в среднем 9-14 дней. Заболевание начинается постепенно с общего недомогания, бессонницы и головной боли, затем к ним присоединяются лихорадка, симптомы поражения центральной нервной системы в виде заторможенности, нарушений сознания и бреда, а также нарушения стула и характерная сыпь в области живота и грудной клетки. Источник инфекции – болеющие брюшным тифом и бактерионосители S. typhi. Бактерионосительство может быть острым, хроническим или транзиторным.

Наряду с другими антигенами возбудитель брюшного тифа содержит Vi-антиген, который обеспечивает устойчивость возбудителя к фагоцитозу (способности специализированных клеток организма, фагоцитов, поглощать и переваривать чужеродные частицы, в том числе и микроорганизмы), способствует хронизации инфекции и брюшнотифозному бактерионосительству.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Обнаружение антител к Vi-антигену S. typhi дает основание подозревать хроническое носительство брюшнотифозных бактерий или развитие иммунной реакции на вакцинацию против брюшного тифа. Отсутствие антител свидетельствует о том, что возбудителя брюшного тифа нет, или о низкой эффективности вакцинации.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

Что может влиять на результат?

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, гастроэнтеролог.

Источник

Серологическое исследование на брюшной тиф

Серологическое исследование на брюшной тиф

Брюшной тиф провоцируется бактерией, относящейся к роду микроорганизмов — сальмонелла. Живёт грамотрицательная палочка только там, где есть кислород. Бактерия не склонна распространять споры, но в условиях агрессивной среды хорошо выживает. Палочка тифа в воде может выживать в течение 5 месяцев, а в кале она будет активна около 1 месяца.

Если палочка попала в продукты питания, в том числе в молочные, то сохранится в них в условиях холодильника в течение месяца, но только при условии небольшого охлаждения. Мгновенно погибает возбудитель при высокой температуре. Даже в воде, нагретой до +60 градусов, тифозный возбудитель погибнет за 5 мин. Жизнеспособность бактерия потеряет и при попадании на неё солнечных лучей. От дезинфицирующих средств палочка тоже быстро погибает. Антигенная структура у микроорганизма сложная. В целях диагностики используются исключительно два антигенных комплекса, это Vi-антиген, а также О-антиген.

Дифференциальная диагностика болезни

Симптомы развития брюшного тифа во многом похожи на прочие инфекционные болезни. И очень важно отличить его своевременно от гриппа, менингококка, бруцеллеза и сыпного типа.

Начали проявляться первые симпотомы возможного брюшного тифа, очень важно провести специфическое обследование в лаборатории, чтобы отличить брюшной тиф от так называемых паратифов и др.

Диагностика брюшного типа состоит из общеклинических методов, а также специфических реакций. Широко применяется серологическое исследование на брюшной тиф. В итоге появляется возможность понять, какова степень тяжести недуга, а также выявить характеристики бактерии, чувствительность к антибактериальным препаратам. Необходимые анализы проводятся в самом начале заболевания и перед выходом из больницы. Если есть необходимость, тест повторяется многократно.

Очень важно провести специфическое обследование в лаборатории, чтобы отличить брюшной тиф от так называемых паратифов.

Характеристика методов обследования

Многих интересует, где можно сдать анализ при малейшем подозрении на недуг. В нашем центре вы сможете пройти обследование, так как мы располагаем собственной многопрофильной лабораторией. Надо отметить, что при неспецифических исследованиях получен будет результат в течение 1 дня, а при специфической реакции потребоваться может 5 дней.

Выявление возбудителя важно не только для больных, но и для носителей. Все результаты исследования вносятся в санитарную книгу. Эта диагностика является обязательной для людей, которые заняты в пищевой промышленности или работают с детьми.

Для проведения тестов у больного человека или потенциального носителя берут на анализ:

В каждом конкретном случае врач индивидуально определяет, какая биологическая среда должна быть сдана. И надо понимать, что действия должны быть быстрыми, так как если были назначены антибиотики, то эффективность диагностики может быть снижена. Все жидкости у человека следует брать до того момента, как начали проводить терапию.

Общеклинические методы диагностики

Они в себя включают самые обычные процедуры, которые состоят в сдаче мочи, а также крови. Любые выявленные изменения покажут более ясную картину, они очень важны. Обычно в общем анализе наблюдаются следующие изменения:

Если оценивать анализ мочи, то можно сказать, что в нем изменения будут традиционными. Это повышение лейкоцитов, а также эритроцитов. Если проводится копрограмма, то в кале выявляют иногда эритроциты, которые говорят о том, что в кишечнике присутствует незначительное кровотечение. При определённых обстоятельствах врачи считают нужным провести исследование на скрытую кровь, чтобы полностью можно было избежать ошибки и вовремя определить, есть ли кровотечения.

Биохимические показатели важны исключительно с целью определения нарушения работы каких-то органов. Иногда у больных развивается пиелонефрит, может появиться гепатит.

Специфические методы

Окончательный диагноз можно поставить только на основе микробиологической диагностики. Если обследование проводится для санитарной книжки, то запись об отсутствии инфекции станет допуском к работе. В специфические разновидности входят: бактериологическое обследование и серологическое.

Бактериологический метод

Данный вариант предполагает, что у больного берут на посев биологический материал. Чаще это желчь. Изучаются морфологические признаки, биохимические и другие. Обязательно должен проводиться тест на чувствительность к антибиотикам, без которого трудно будет назначить терапию с противомикробным действием.

Если говорить об анализе крови, то его следует проводить именно в самые первые дни после появления недуга. Положительный результат позволит подтвердить диагноз. Когда обнаруживается подобная сальмонелла в стуле, то это может говорить, как о носительстве, так и о болезни. Именно поэтому важно обследоваться дополнительно.

В чём заключается серологическое исследование на брюшной тиф

В основании большинства серологических методик всегда лежит присоединение исследуемого антигена и самих антител, производимых в организме больного. Серологическая реакция на брюшной тиф называется реакцией Видаля. Ценность данного метода состоит в том, что антитела нарастают на всех последующих стадиях болезни. Некоторые лаборатории для исключения ошибок проводят реакцию, сокращенно именуемую РПГА.

Нельзя не отметить, что именно серологическое исследование на брюшной тиф даёт возможность прояснить определённый диагноз, подтвердить, либо полностью опровергнуть его, а также понять, как произошло заражение.

Микробы на начальной стадии попадают в человеческий организм. И на этом этапе бактериологический способ никак не поможет. Серологическая методика является популярной, она не представляет никакую сложность ни для медицинского персонала, ни для пациентов. Берется кровь из вены в быстром темпе. По увеличению количества антител понятно, какая стадия у заболевания. Антитела также могут появиться при вакцинации. В крови они остаются после вакцины или перенесённой инфекции на долгое время.

Обычно результат выдаётся через несколько дней. Уровень показателя IgM зависит от самой инфекции, IgG сохраняется долго в организме. Оба показателя помогают определить стадию недуга. Кровь всегда целесообразно сдавать в начале болезни, а также при профилактике. В нашем медицинском центре пройти обследование можно без направления и очередей. Оснащена клиника современным оборудованием, позволяющим проводить самые разные тесты. Если вам нужно пройти обследование для медицинской книжки, у нас вы сможете сдать все необходимые анализы и получить консультацию специалистов.

Источник

Брюшной тиф (кач) в Москве

Брюшной тиф — это инфекционное заболевание, которое при отсутствии лечения может привести к летальному исходу. Брюшной тиф вызывается бактериями, принадлежащими к роду Salmonella и серотипу Typhi. Резервуаром возбудителя является исключительно человек. Заражение происходит чаще всего в результате употребления воды или пищи, зараженной человеческими фекалиями, или в результате передачи напрямую от человека к человеку.
Анализ крови позволяет выявить специфические антитела к антигенам сальмонелл и используется для выявления брюшного тифа.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Брюшной тиф (кач)?

● диагностика брюшного тифа
● непрерывная лихорадка с головной болью, болью в животе, диареей или запором
● дифференциальная диагностика инфекций пищевого происхождения

Подробное описание исследования

Брюшной тиф характеризуется непрерывной лихорадкой с головной болью, болью в животе, анорексией, депрессией (от греческого tuphos) в сочетании с диареей или запором.
Salmonella typhi очень устойчива, может выживать в течение нескольких недель в окружающей среде и в течение нескольких месяцев в воде. Возбудитель проникает в клетки слизистой оболочки кишечника и вызывает острое воспаление, которое сопровождается обычно тяжелой диареей. Появление клинических симптомов происходит после инкубационного периода в течение одной-трех недель после заражения.
Симптомы брюшного тифа:

При легких формах состояние остается неизменным в течение двух недель, затем выздоровление длится несколько недель. В более тяжелых формах, когда могут возникнуть осложнения со стороны кишечника, сердца или нервной системы, брюшной тиф может быть фатальным, если его не лечить. Salmonella typhi — самый опасный вид сальмонеллы, вызывающий наиболее тяжелое и опасное заболевание.
Эпидемиологической особенностью этих инфекций является наличие здоровых носителей этих бактерий. После выздоровления от хронического брюшного тифа от 2 до 5% людей продолжают содержать Salmonella Typhi (в основном их локализация в желчном пузыре), которые эпизодически выделяются с калом и могут быть причиной повторных вспышек заболевания.
Пути инфицирования:

Люди, путешествующие в районы, эндемичные по брюшному тифу, могут быть подвержены риску заражения. Хотя в целом он невысок в гостиницах и бизнес-центрах, где соблюдаются санитарные нормы и гигиена питания.
Чтобы обезопасить себя от заражения брюшным тифом в эндемичных районах, необходимо соблюдать следующие правила гигиены:

Анализ сыворотки крови на брюшной тиф выявляет наличие специфических антител к О-антигену Salmonella typhi всех ее серогрупп: А, В, С1, С2, Д, Е. Проводится методом реакции пассивной гемагглютинации, что является одним из видов иммуноанализа. В процессе заболевания в организме вырабатываются специфические антитела на возбудитель – сначала иммуноглобулины класса IgG, а затем класса IgM. Выявить заболевания по наличию антител возможно через 1-2 недели после заражения.

Особенности и преимущества методики

В лаборатории Гемотест исследование реализовано на наборах НПП ДиаВита, «Диагностикум эритроцитарный сальмонелезный (Тест Ви РПГА)»

Источник

Серологическое исследование на брюшной тиф что это такое

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Методические рекомендации МР 4.2.0249-21 “Серологическая диагностика острых кишечных инфекций методом РПГА (шигеллеза, сальмонеллеза и брюшного тифа)” (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 20 мая 2021 г.) (документ не вступил в силу)

Методические рекомендации МР 4.2.0249-21
“ Серологическая диагностика острых кишечных инфекций методом РПГА (шигеллеза, сальмонеллеза и брюшного тифа)”
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 20 мая 2021 г.)

Дата введения: 1 сентября 2021 г.

I. Область применения

1.2. МР разработаны с целью унифицирования использования РПГА при шигеллезе, вызванном Shigella sonnei и Shigella flexneri, сальмонеллезе, вызванной Salmonella серологических групп О2(A), О4(B), О7( ), О8( ), О9( ), О3,10(E), и интерпретации результатов с учетом клинической выраженности заболевания и активности эпидемического процесса на конкретной территории.

II. Общие положения

2.3. Серологическая диагностика способствует совершенствованию системы эпидемиологического надзора за ОКИ, так как количественная и качественная характеристика иммунного ответа на встречу с возбудителями позволяет диагностировать стертые и субклинические формы болезни, выявлять ранее переболевших, обеспечивает более полную и обоснованную информацию для оценки активности эпидемического процесса.

2.4. Серологический метод позволяет дифференцировать транзиторное носи- тельство от субклинической формы брюшного тифа. При транзиторном носительстве отсутствует достоверный сдвиг в уровнях сывороточных антител. Наличие положительной динамики указывает на развитие патологического процесса, который может характеризоваться субклиническим течением.

В настоящее время более 60% ОКИ остаются бактериологически нерасшифрованными. Выявление антител и определение их класса может использоваться для оперативного эпидемиологического анализа в очагах ОКИ с целью уточнения фактической распространенности инфекции в коллективе и поиска источника. Быстрое и полное выявление всех инфицированных в очаге позволяет конкретизировать профилактические, противоэпидемические, лечебные мероприятия и способствует ликвидации очага.

III. Материально-техническое обеспечение метода 3

3.1. Для проведения РПГА используют стандартное общелабораторное оборудование и материалы:

— термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру плюс 37°С плюс/минус 1°С;

— водяная баня или термостат, поддерживающие температуру плюс 56°С плюс/минус 1°С;

— холодильник, поддерживающий температуру от плюс 2 до плюс 8°С;

— морозильная камера, поддерживающая температуру не выше минус 16°С;

— одноканальные дозаторы переменного объема с диапазоном объема доз от 20 до 1000 мкл;

— многоканальные дозаторы переменного объема, объем дозы 50 мкл;

— дозатор одноканальный для пошагового дозирования (по типу степпер), объем дозы 25 мкл;

— автоматический встряхиватель (шейкер) для пробирок;

— система для взятия крови по типу «Вакутейнер» (англ. Vacutainer) без наполнителя или с активатором свертывания;

— микропробирки на 1,5-2,0 мл (по типу «Эппендорф»);

— стерильные пробирки (многоразового или однократного использования), объем 10 мл;

— планшеты круглодонные для иммунологических реакций однократного применения;

— одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема от 20 мкл до 1000 мкл;

3.2. Наборы диагностикумов и реагенты, зарегистрированные и разрешенные для использования на территории Российской Федерации в установленном порядке 5 :

— эритроцитарные диагностикумы для постановки РПГА;

— редуценты: L-цистеин; унитиол 50 мг/мл (димеркаптоопропансульфонат натрия);

— стерильный физиологический раствор (0,9% раствор натрия хлорида), pH (может входить в набор диагностикумов).

3.3. Для серодиагностики бактериальных ОКИ могут применяться следующие эритроцитарные диагностикумы, зарегистрированные в государственном реестре медицинских изделий и организаций (индивидуальных предпринимателей) 6 :

— диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Ви-антигенный, жидкий;

— диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный, сухой;

— диагностикумы эритроцитарные шигеллезные: Зонне антигенный, жидкий; Зонне антигенный, сухой; Флекснера 1-5 антигенный, жидкий; Флекснера 1-5 антигенный, сухой; Флекснера 6 антигенный, сухой.

IV. Диагностикумы эритроцитарные

4.1. Диагностикумы эритроцитарные для постановки РПГА содержат специфические О-антигены бактерий рода Shigella и Salmonella, а также Vi-антиген возбудителя брюшного тифа и паратифа С, фиксированные на поверхности эритроцитов. При взаимодействии сенсибилизированных эритроцитов с гомологичными антителами в сыворотке крови инфицированных лиц наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.

4.2. Жидкие диагностикумы представляют собой 1%-ю или 0,75%-ю взвесь формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных соответствующими антигенами Shigella и Salmonella, в фосфатном буферном растворе. Препараты представляют собой гомогенную непрозрачную суспензию коричневого цвета (окраска взвешенных в жидкости формалинизированных эритроцитов). При хранении диагностикумов эритроциты оседают, образуя плотный коричневый осадок и прозрачную желтоватую надосадочную жидкость.

4.3. Сухие диагностикумы представляют собой 5%-ю или 10%-ю взвесь форма- линизированных и сенсибилизированных соответствующими О-антигенами Shigella и Salmonella эритроцитов, высушенных в сахарозо-желатиновой среде или боратно-янтарном буферном растворе с добавлением мясопептонного бульона и сахарозы.

V. Получение сыворотки крови

5.1. Для серологических исследований используют сыворотку крови (прозрачная, негемолизированная, без видимых глазом эритроцитов). Объем сыворотки зависит от количества используемых диагностикумов, а также необходимости исследования парных сывороток и определения класса антител.

5.2. Кровь собирают согласно методическим указаниям 7 с соблюдением правил асептики в стерильную пробирку с использованием системы по типу «Вакутейнер» (англ. Vacutainer) без наполнителя или с активатором свертывания или аналогичной, разрешенной к применению в Российской Федерации.

5.3. Не позднее 24 часов после взятия крови сыворотку отделяют и переносят в стерильную пробирку. Для этого пробирки с кровью оставляют до образования сгустка при комнатной температуре на 1-2 часа или помещают в термостат при плюс 37°С на 10-15 минут. При необходимости образовавшийся сгусток отслаивают от стенок пробирки (например, бактериологической петлей). Для лучшей ретракции сгустка и более полного отделения сыворотки пробу выдерживают при плюс 4°С в холодильнике в течение 1 часа или центрифугируют 5-10 минут при 2,5-3,0 тыс. об/мин.

Если сыворотка содержит примесь эритроцитов, ее центрифугируют при условиях, указанных в первом абзаце п. 5.3.

VI. Постановка РПГА микрометодом

6.1. РПГА проводят микрометодом в планшетах (круглодонных для иммунологических реакций однократного применения) с использованием автоматических дозаторов. Объем титруемой сыворотки составляет 0,05 мл (50 мкл). При исследовании нескольких диагностикумов использование многоканальных дозаторов ускоряет исследование, поскольку позволяет проводить разведение сыворотки синхронно в нескольких рядах планшета.

6.2. В случае если физиологический раствор (0,9%-й раствор натрия хлорида, pH ) не входит в набор с диагностикумами (п. 3.2), то допускается его приготовление из химически чистого хлористого натрия (NaCl) на дважды дистиллированной или деионизированной воде (с целью предотвращения незначительных количеств солей металлов, которые могут вызвать гемолиз эритроцитов или их агглютинацию).

6.3. Исследование сыворотки:

— у взрослых и детей старше 12 лет начинают с разведения 1:50 (последнее разведение 1:1600);

6.5. Последовательные двукратные разведения сывороток готовят непосредственно в планшетах, используя для этого один ряд для каждого диагностикума (достаточно 5-6 лунок в ряду). Во все лунки ряда вносят по 0,05 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида.

6.6. В первую лунку ряда вносят 0,05 мл из пробирки с рабочим разведением (п. 6.4) и получают разведение 1:50 (1:10 для детей или при выявлении антител к Vi-антигену). Затем делают серию последовательных разведений путем переноса 0,05 мл сыворотки из предыдущей лунки (начиная с первой) в следующую лунку ряда (заполненную тем же количеством 0,9%-го раствора натрия хлорида). При переносе содержимое лунки аккуратно перемешивают, избегая образования пузырьков. Из последней лунки удаляют 0,05 мл для сохранения одинакового объема сыворотки (в емкость с дезинфицирующим раствором).

6.7. Перед использованием флакон с диагностикумом осторожно встряхивают до получения гомогенной взвеси и полного исчезновения осадка на дне.

6.8. В каждую из лунок ряда с разведениями сыворотки добавляют соответствующий диагностикум в объеме согласно инструкции производителя (например, по 0,025 мл).

6.9. Планшеты после внесения диагностикума осторожно встряхивают и помещают в термостат при температуре 37 плюс/минус 1°С. Учет реакции проводят согласно инструкции производителя.

VII. Контроли специфичности РПГА

7.2. Подтверждение отсутствия спонтанной агглютинации диагностикума: в две свободные лунки планшета добавить по 0,05 мл физиологического раствора и 0,025 мл диагностикума.

7.3. Подтверждение отсутствия в испытуемой сыворотке агглютининов к эритроцитам барана (контроль для диагностикумов на основе эритроцитов барана): в две свободные лунки планшета внести по 0,05 мл рабочего разведения исследуемой сыворотки и 0,025 мл 1%-й взвеси несенсибилизированных формалинизированных эритроцитов барана, которые прилагаются к диагностикуму (контрольные эритроциты).

7.4. Проверка отсутствия хлопьев в исследуемой сыворотке (обязательный контроль): в две свободные лунки планшета внести по 0,05 мл рабочего разведения исследуемой сыворотки.

VIII. Учет результатов РПГА

8.1. Результаты РПГА для исследуемой сыворотки учитываются в том случае, если все контроли дали удовлетворительные результаты:

— отмечена агглютинация диагностикума с гомологичной диагностической сывороткой в разведении, указанном производителем (не менее чем на «3+», п. 8.2);

— отсутствует спонтанная агглютинация диагностикума в 0,9%-м,растворе хлорида натрия: все эритроциты должны осесть на дне лунки в виде «пуговки»;

— отсутствует агглютинация несенсибилизированных эритроцитов барана с испытуемой сывороткой: все эритроциты должны осесть на дне лунки в виде «пуговки»;

— испытуемая сыворотка не содержит хлопьев и осадка.

8.2. Учет результатов РПГА проводится по четырехкрестной системе (если производитель не приводит другую систему учета результатов):

— «4+» или «++++»: все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно лунки в виде «зонтика»;

— «3+» или «+++»: агглютинированы почти все эритроциты, на их фоне имеется мало заметное кольцо из осевших неагглютинированных эритроцитов;

— «2+» или «++»: наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде «колечка» или «пуговки»;

— «1+» или «+»: большинство эритроцитов неагглютинировано и осело в центре дна лунки в виде маленького «колечка» или «пуговки»;

— «-»: признаков агглютинации нет, эритроциты осели в центре дна лунки в виде маленького «колечка» или “пуговки” с ровными краями.

8.3. Уровень антител в исследуемой пробе равен последнему разведению сыворотки, которое дает ярко выраженную агглютинацию эритроцитов не менее чем на «3+».

IX. Определение уровня антител класса IgG

9.1. Наиболее доступным способом разделения антител классов IgM и IgG является разрушение макроглобулиновых антител (к которым относятся молекулы IgM) с помощью редуцентов. Под действием редуцирующих веществ IgM-антитела расщепляются с разрывом дисульфидных связей молекул белка, диссоциируя при этом на 6-8 мономеров, не обладающих активностью антител. Антитела класса IgG устойчивы к действию редуцентов и не разрушаются. Однако этот метод не позволяет оценить наличие IgM, если их количество в сыворотке меньше или равно антителам класса IgG.

9.2. В качестве редуцирующих веществ используют L-цистеин (солянокислый, или «свободный»), цистин, меркаптоэтанол, унитиол, этантиол, и др.

9.3. Для обработки сывороток 5%-й раствор унитиола (50 мг/мл) разводят в стерильной пробирке в 4 раза 0,9%-м раствором натрия хлорида до получения концентрации 1,25%, т. е. к 1 объему 5%-го раствора унитиола добавляют 3 объема 0,9%-го раствора натрия хлорида. Приготовленный таким образом 1,25%-й раствор унитиола можно хранить в холодильнике при плюс 4°С в течение недели в пробирке с хорошо притертой воздухонепроницаемой пробкой.

9.5. Парные сыворотки всегда исследуются в одном опыте с одним диагностикумом: при определении суммарных антител и уточнении их класса.

X. Критерии постановки диагноза по результатам серологического исследования сыворотки крови

10.1. Диагноз шигеллеза или сальмонеллеза по результатам исследования сывороток на наличие антител к возбудителям может быть основан на:

— констатации так называемого «диагностического» уровня антител класса IgG при однократном исследовании сыворотки крови, взятой не ранее 7-8-го дня болезни;

— выявлении достоверного изменения уровня антител класса IgG при одновременном исследовании парных проб сывороток, взятых в динамике заболевания с интервалом 7-8 дней.

На поздних сроках заболевания уровень антител в первой сыворотке может превышать диагностический уровень и не иметь достоверного увеличения во второй сыворотке.

XI. Интерпретация результатов РПГА с использованием критерия «диагностический уровень»

11.1. Условно-диагностический уровень антител при исследовании нативной сыворотки (взятой не ранее 7-8-го дня заболевания) от больных с клиническими симптомами шигеллеза или сальмонеллеза, при исследовании с диагностикумами шигел- лезными (Зонне и Флекснера), сальмонеллезными (комплексным или серогрупп А, В, С1, С2, D и Е) составляет:

— для суммарных антител: 1:100 для взрослых и детей старше 6 лет;

11.3. Для выявления предполагаемого источника инфекции при возникновении групповых и спорадических случаев шигеллеза и сальмонеллеза, вопрос об использовании серологического метода рекомендуется решать коллегиально, учитывая результаты эпидемиологического расследования очага, наличие клинических признаков заболевания и вакцинальный статус предполагаемого источника. В случае отрицательного результата бактериологического исследования пробы фекалий предполагаемого источника инфекции необходимо определять уровень антител класса IgG. При доследовании с диагностикумами шигеллезными (Зонне и Флекснера), сальмонеллезными комплексным или серогрупп А, В, C1, С2, D и Е диагностическим уровнем IgG следует считать 1:40 и выше (приложение к настоящим МР).

11.4. Для выявления источника инфекции при возникновении групповых и спорадических случаев брюшного тифа и паратифов диагностический уровень IgG составляет:

— при исследовании с О-диагностикумами 1:40 и выше;

XII. Интерпретация результатов РПГА при исследовании парных сывороток

12.1. Для диагностики шигеллеза и сальмонеллеза, включая брюшной тиф и паратифы, сопоставляют уровни антител, обнаруженных в парных сыворотках, полученных в динамике заболевания с интервалом 7-8 дней: суммарных в нативной сыворотке и класса IgG в сыворотке, обработанной редуцентом. Парные сыворотки исследуют одновременно (в одном опыте), используя диагностикум одной серии: при определении суммарных антител и уточнении их класса.

12.2. Диагностически достоверным считается не менее чем четырехкратное (на 2 разведения) увеличение или снижение уровня специфических антител при исследовании парных сывороток. Уровень антител нарастает в течение первых двух недель болезни, на более поздних сроках снижается.

— при подозрении на сальмонеллез и шигеллез: первая проба крови в остром периоде заболевания (не ранее 5-го дня от начала заболевания), вторая проба крови через 7-8 дней после первой;

— при подозрении на брюшной тиф и паратифы: первая проба крови после окончания лихорадочного периода, вторая проба крови через 7-8 дней после первой (в случае отрицательного результата бактериологического исследования и уровня антител в первой сыворотке ниже диагностического, п. 11.2).

При соблюдении сроков и интервалов взятия проб крови, как правило, выявляется достоверное нарастание уровня суммарных антител (IgM + IgG) и антител класса IgG. При нарушении сроков взятия крови изменения уровня антител могут быть менее выражены.

12.4. В результате серологического исследования возможно выявление нарастания уровня антител не к одному, а к двум и более взятым в реакцию антигенам, так как у грамотрицательных бактерий есть общие антигены, что приводит к появлению не только гомологических, но и гетерологических антител. Иммунологический ответ следует считать диагностическим (специфическим), если уровень антител к подозреваемому возбудителю увеличился в 4 и более раза, в то время как уровни гетерологических антител не изменились или снизились. Достоверным признаком инфекционного процесса является наличие диагностического уровня антител класса IgG в однократно взятой пробе (пункты 11.1, 11.2) и его нарастание при исследовании парных сывороток.

XIII. Особенности интерпретации результатов РПГА у детей

13.1. У детей первых месяцев жизни на фоне низкой иммунологической реактивности отсутствует или недостаточно напряжен гуморальный иммунитет. Проведение серологических исследований у детей в возрасте до 12 мес. не рекомендуется, поскольку обнаружить в РПГА специфические антитела к возбудителям ОКИ удается крайне редко. Наибольший процент положительных реакций отмечен у детей 6 лет и старше.

13.2. У детей в возрасте от 1 года до 6 лет уровень антител нарастает на 2-3-й неделях болезни и лишь у 60% обследованных достигает 1:100 и выше.

XIV. Интерпретация результатов РПГА при исследовании сыворотки, обработанной редуцентом

14.1. Если уровень антител после обработки редуцентом не снижается (результаты, полученные для обработанной и необработанной сыворотки одинаковы), то выявленные антитела относят к классу IgG, что свидетельствует о длительности заболевания более 7 дней.

14.2. Отсутствие антител в обработанной сыворотке достоверно свидетельствует об отсутствии антител класса IgG. Это косвенно указывает на принадлежность антител к классу IgM («ранние» антитела в первые дни заболевания). Сыворотку необходимо сохранить и повторно исследовать вместе с парной, взятой через 7-8 дней.

У хронических бактерионосителей, а также у реконвалесцентов и лиц, переболевших брюшным тифом, антитела класса IgM (свидетельствующие об остроте процесса) отсутствуют, поэтому результат (наличие антител в необработанной сыворотке и полное их исчезновение после обработки редуцентом) следует рассматривать как неспецифическую реакцию.

14.3. Снижение уровня антител в обработанной сыворотке по сравнению с необработанной свидетельствует о том, что антитела представлены классами IgM и IgG, снижение уровня произошло за счет разрушения IgM.

14.4. Увеличение уровня антител после обработки редуцентом указывает на лабораторную ошибку при постановке РПГА. Исследование следует повторить.

XV. Алгоритм серологического обследования при сальмонеллезе и шигеллезе

15.1. Для подтверждения клинического диагноза сальмонеллеза первоначально сыворотки изучают с комплексным диагностикумом эритроцитарным сальмонеллезным О-антигенным комплексным, содержащим антигены основных серологических групп (А, В, С, D, Е):

— если в сыворотке обнаружены антитела к сальмонеллезным О-антигенам 6, 7 (серогруппа ) или 1, 9, 12 (cepoipynna D), то с учетом клинических или эпидемиологических показаний сыворотку дополнительно исследуют в РПГА с диагностикумом эритроцитарным сальмонеллезным Ви-антигенным для диагностики паратифа С или брюшного тифа.

15.2. Для подтверждения клинического диагноза шигеллеза, ввиду отсутствия комплексного диагностикума, сыворотки исследуют одновременно с тремя шигеллез- ными диагностикумами (Зонне, Флекснера 1-5; Флекснера 6).

15.3. Если уровень антител в сыворотке, взятой не ранее 5-го дня от начала заболевания, ниже диагностического уровня, сыворотку сохраняют в холодильнике и повторно исследуют одновременно со второй (парной) сывороткой, взятой через 7-8 дней после первой с диагностикумом той же серии.

15.4. Если в сыворотке выявлены антитела к антигенам Shigella или Salmonella в количестве, равном или превышающем условно-диагностический уровень, часть сыворотки обрабатывают редуцентом и повторно исследуют в РПГА для определения класса антител (одновременно исследуют обработанную редуцентом и необработанную пробы) (см. главу IX). При необходимости вторая часть необработанной сыворотки хранится в холодильнике для исследования с парной сывороткой, взятой через 7-8 дней после первой.

XVI. Алгоритм серологического обследования при брюшном тифе

16.1. Для подтверждения клинического диагноза брюшной тиф, в том числе ретроспективного (при позднем обращении больного за медицинской помощью, затяжном течении заболевания, когда существует высокая вероятность отрицательного результата бактериологического исследования (например, на фоне антибактериальной терапии) РПГА ставят с двумя диагностикумами эритроцитарными сальмонеллезными: О-антигенным серогруппы D (1, 9, 12) и Ви-антигенным.

16.2. В очаге брюшного тифа для активного выявления больных среди контактных лиц, относящихся к работникам отдельных профессий, производств и организаций, РПГА проводят с двумя диагностикумами эритроцитарными сальмонеллезными: О-антигенным серогруппы D (1, 9, 12) и Ви-антигенным.

16.3. Для выявления по эпидемическим показаниям предполагаемого источника инфекции (лица в состоянии хронического брюшнотифозного бактерионосительства, реконвалесценты или больные брюшным тифом в манифестной или субклинической форме) РПГА ставят с двумя диагностикумами эритроцитарными сальмонеллезными: О-антигенным серогруппы D (1, 9, 12) и Ви-антигенным.

16.4. При диспансерном наблюдении за лицами, переболевшими брюшным тифом, РПГА ставят с диагностикумом эритроцитарным сальмонеллезным Ви-антигенным.

16.7. Если в нативной сыворотке уровень антител к антигенам возбудителя брюшного тифа или паратифов равен или превышает условно-диагностический, часть сыворотки обрабатывают редуцентом и повторно исследуют в РПГА для определения класса антител (одновременно исследуют обработанную редуцентом и необработанную пробы) (см. главу IX). При необходимости вторая часть необработанной сыворотки хранится в холодильнике для исследования с парной сывороткой, взятой через 7-8 дней после первой.

XVII. Особенности серологической диагностики состояния бактерионосительства

17.1. В случае формирования острого бактерионосительства (при брюшном тифе, паратифах, реже при других сальмонеллезах) характерно наличие в сыворотке высокого уровня антител класса IgG (уровень антител практически не снижается после обработки сыворотки редуцентом).

17.3. У транзиторных бактерионосителей (не имеющих в анамнезе клинически выраженного заболевания) антитела к О- и Vi-антигенам возбудителей отсутствуют или представлены антителами класса IgM. Если после обработки сыворотки редуцентом уровень антител класса IgG сохраняется 1 : 40 и выше, то у таких пациентов можно предполагать наличие субклинической формы инфекции.

17.4. Повышение уровня антител класса IgG может происходить в результате многократной специфической вакцинации, поэтому при интерпретации результатов РПГА следует учитывать прививочный анамнез.

XVIII. Эффективность серологического метода диагностики ОКИ

18.1. При высоком уровне заболеваемости населения ОКИ, значительная часть которых остается этиологически нерасшифрованной, серологический метод является дополнительным методом для установления этиологии ОКИ. Полученные результаты оцениваются с учетом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки и т.д.

При проведении сероэпидемиологического анализа ОКИ серологическое исследование позволяет оценить число переболевших, интенсивность циркуляции возбудителя, риск заражения, пораженность отдельных социально-профессиональных групп населения.

При сальмонеллезе с выраженными клиническими проявлениями диагностический уровень антител на 5-10-й день заболевания регистрируют у 80-90% больных (бактериологически подтвержденные случаи), выраженная динамика уровня антител отмечается только у 25-45% больных не ранее 2 3-й недели заболевания.

3 Примечание: допускается использование средств измерений, вспомогательного оборудования и материалов с аналогичными или лучшими характеристиками; допускается использование других реактивов с аналогичными характеристиками.

4 Утилизация отходов проводится в соответствии с СанПиН 3.3686-21.

5 Пункт 4 статья 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации»; постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416 «Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий».

6 Статья 38 Федерального закона от 21.11.2011 № 323-Ф3 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».

7 МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории», утвержденные Роспотребнадзором 23.12.2005.

Понятие «условно-диагностический уровень антител»

1. На величину «диагностического» уровня антител влияет конкретная эпидемиологическая ситуация на территории, на которой риск заражения возбудителями шигеллеза, сальмонеллеза, брюшного тифа и степень их распространения среди населения варьируют, что ведет к уменьшению или повышению уровня «фоновых» антител у здоровых лиц. Рекомендуется установление «диагностического» уровня в каждом конкретном регионе (административной территории) по результатам титрования сывороток, взятых не менее чем от 100 здоровых лиц (взрослого и детского контингента).

2. Значение «диагностического» уровня в определенной степени условно и зависит от многих факторов. В условиях многолетней циркуляции возбудителей среди людей, контаминации ими пищевых продуктов и объектов окружающей бреды, при естественном инфицировании населения небольшими дозами возбудителей в сыворотках здоровых людей присутствуют анамнестические антитела (так называемые «фоновые» антитела) классов IgM и IgG.

3. Определенный уровень антител в сыворотках здоровых людей может быть обусловлен:

— перенесенным в прошлом заболеванием, в том числе в стертой или субклинической форме (шигеллез, сальмонеллез, брюшной тиф);

— иммунным ответом на вакцинацию (брюшной тиф, шигеллез Зонне), о чем свидетельствует сертификат профилактических прививок или справка из автоматической системы управления иммунизацией.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Федеральный закон от 21.11.2011 № 323-Ф3 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».

3. Постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 № 1416 «Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий».

4. СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».

5. МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории».

6. МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды».

7. Методические рекомендации № 0100/13745-07-34 «Бактериологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А, В и С».

Обзор документа

С 1 сентября 2021 г. применяются Методические рекомендации МР 4.2.0249-21 «Серологическая диагностика острых кишечных инфекций методом РПГА (шигеллеза, сальмонеллеза и брюшного тифа)».

Рекомендации предназначены для органов и организаций Роспотребнадзора, а также могут быть использованы научными и медицинскими организациями, осуществляющими серологическую диагностику острых кишечных инфекций.

Источник